Dr. House *-*

Interpretado por Hugh Laurie. Es el protagonista del programa, un médico eminente que dirige el Departamento de diagnóstico médico. Cuenta con una doble especialidad en Infectología y Nefrología. Es un misántropo con una actitud prepotente, cínica y sarcástica, que tiene aversión a tratar a los pacientes. El personaje está inspirado en parte por Sherlock Holmes, aunque también se le ha comparado con otros personajes como Cyrano de Bergerac o el profesor Henry Higgins (protagonista de la obra de teatro Pigmalión y su popular adaptación al cine, My Fair Lady), y con Perry Cox scrubs. Utiliza métodos poco ortodoxos para diagnosticar, las terapias alternativas y la racionalidad incondicional, lo que le ocasionan varios conflictos entre él y sus colegas.[70] Es adicto a la Vicodina, la usa para controlar su dolor, derivado de un infarto en un músculo de su pierna, ocurrido años atrás; el accidente lo obliga a caminar con un bastón. No tiene una vida social muy activa, y su único amigo es el Dr. James Wilson

Interpretada por Lisa Edelstein. Es Decana en Medicina, endocrinóloga y directora del hospital, y por tanto jefa de House, con quien se enfrenta constantemente por su poco ortodoxa manera de hacer su trabajo. Pese a ello, y a todos los problemas que le ha causado, se niega a plantearse su despido, al considerarle el mejor médico del hospital y uno de los mejores médicos diagnostas del mundo. A lo largo de la serie ha demostrado sus intenciones de ser madre por lo que ha intentado métodos de inseminación artificial. Conoció a House en la época de la universidad y lo contrató porque ningún otro hospital lo había admitido. A partir de la tercera temporada la tensión sexual entre ella y House se hace cada vez más evidente.

Interpretado por Robert Sean Leonard. Es un oncólogo y Jefe del Departamento de oncología del hospital. Es el único amigo de House que se conoce en la serie, por lo que sólo él se atreve a hablarle con sinceridad y discutirle de tú a tú, aportando un contrapunto a los a veces extravagantes razonamientos de House y siempre soporta sus bromas y maltratos. Por lo general no participa en el diagnóstico de los casos. Es un médico ejemplar y siempre apegado al protocolo (todo lo contrario a House). Vivió en casa de House durante algunos capítulos, debido a una infidelidad de su mujer. Durante el transcurso de la 4ª temporada mantiene un romance con la Dra. Amber Volakis. A raíz de la muerte de esta, al final de la 4ª temporada, renuncia al Hospital, pero retorna en la siguiente temporada.